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TSZ Elisa試劑盒標準的操作方法
點擊次數(shù):790 更新時間:2017-06-01

TSZ Elisa試劑盒,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的高質(zhì)量的純化水電導率小于.5μs/cm。

.加樣
   加樣時應將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
2保溫
   在建立ELISA 方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)
-2 小時,產(chǎn)物的生成可達。為避免蒸發(fā),板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規(guī)定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應,邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結(jié)果,將質(zhì)控放在非邊緣位置。
3洗滌
   TSZ Elisa試劑盒洗滌在ELISA 過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可以說在ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
    洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
TSZ Elisa試劑盒洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應按要求稀釋,所用的水電導率在.5us/cm 之下,洗液如果結(jié)晶應待其融解后配制。保證洗板浸泡時間為40 秒左右,孔內(nèi)液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡。

 

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