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技術(shù)文章

檢測ELISA試劑盒對牛乳中
點擊次數(shù):1071 更新時間:2016-11-29

檢測ELISA試劑盒對牛乳中

  初步組裝試劑盒并對試劑盒的各組分的穩(wěn)定性進行了檢測和優(yōu)化,成功建立了能在6個月內(nèi)維持穩(wěn)定的ELISA試劑盒,并以所組建的試劑盒對牛奶樣品中的添加藥物進行了測定。利用5C0雜交瘤細胞株的小鼠腹水單抗建立了檢測SM殘留的間接競爭ELISA方法。采用包被抗原稀釋度∶3200,腹水抗體的工作濃度∶.6×05,尺度曲線線性方程為y=.0522-0.3276x(0~000ng/ml),半數(shù)按捺濃度為93.22ng/ml,檢測限約為5ng/ml。氨基糖苷類抗生素是一類應(yīng)用廣泛的廣譜抗菌藥物,主要包括(SM)、(GM)、(KM)等,對奶牛乳房炎、等有很好的療效,常用作獸醫(yī)臨床治療及飼料藥物添加劑。對患乳房炎奶牛進行肌肉打針和乳房給藥治療,采用本試劑盒測定牛奶中的殘留濃度,證明用藥后牛奶的廢棄期分別為至少2d和4.5d。分別采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了的5種人工抗原,從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進行比較,*選擇活化酯法合成的BSA-SM/b作為免疫抗原,通過雜交瘤技術(shù)獲得株能不亂分泌抗特異性單克隆抗體的雜交瘤細胞株5C0。通過實驗比較了5種樣品處理方法,選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測定。為探索一種能夠快速有效的檢測牛奶中殘留的方法,本研究采用單克隆抗體技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附測定等技術(shù),合成人工抗原,制備出抗單克隆抗體,建立了檢測牛奶中SM殘留的ELISA測定法,組建成快速檢測ELISA試劑盒并進行了優(yōu)化和實際應(yīng)用。

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